sigma蛋白酶k使用方法

sigma蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解?？梢杂糜谙鞣N蛋白。用于各種常見的分子生物學、細胞生物學等相關(guān)實驗，例如基因組DNA抽提、酶的消化去等。

酶活力，>30U/mg。在37℃，以血紅蛋白為底物，1分鐘內(nèi)可以產(chǎn)生相當于1微摩爾酪氨酸Folin陽性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量，定義為一個單位sigma蛋白酶k酶活力。

在很寬的pH范圍內(nèi)有效，有效的pH范圍為pH4.0-12.5，*pH范圍為pH7.5-8.0。

sigma蛋白酶k的*反應溫度為65℃，但在65℃或更高的溫度sigma蛋白酶k自身的也非常迅速地降解。很多時候反應溫度選擇50-55℃。

在0.2-1%SDS或約10mM尿素存在的情況下，蛋白酶K顯示更高的酶活性。sigma蛋白酶k的常用工作濃度為0.05-1mg/ml，根據(jù)所用緩沖液是否含有SDS、尿素、pH是否適合、溫度是否適合等因素確定具體的工作濃度。

 

sigma蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。sigma蛋白酶k不被金屬離子、螯合劑、巰基試劑或胰蛋白酶/麋蛋白酶蛋白抑制劑失活。sigma蛋白酶k也是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。

 

sigma蛋白酶k使用：

孵育溫度為55至65℃，sigma蛋白酶k在65ºC 的活性比 25ºC的活性高12倍。在溫度65 ºC 之上迅速變性。在95ºC 加熱10分鐘、使用PMSF等蛋白酶抑制劑或用苯酚/氯仿抽提均可失活。理想孵育溫度為58℃，孵育時間為15分鐘至48小時；理想孵育時間為2小時。