SIGMA蛋白酶K的應(yīng)用

SIGMA蛋白酶K采用基因突變技術(shù)，對(duì)基因進(jìn)行定點(diǎn)突變后，將其重組到酵母染色體上，利用發(fā)酵技術(shù)，通過誘導(dǎo)獲得高活性的重組SIGMA蛋白酶K，通過基因改造后，提高大大提高了酶的活性，SIGMA蛋白酶K是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。

在pH4到pH12的條件下均有活性，在SDS、尿素或EDTA存在時(shí)亦很穩(wěn)定。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的降解。此酶經(jīng)脫色和色譜純化去除了RNA和DNA，也檢測(cè)不到其它雜酶活性。

由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定，還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力，因而它應(yīng)用很廣泛，主要用在基因診斷試劑盒、基因組DNA提取試劑盒、RNA提取試劑盒中去除DNA和RNA制備中的核酸酶，也可以于提取組織中非蛋白成份降解含有蛋白質(zhì)的雜質(zhì)。

 

SIGMA蛋白酶K應(yīng)用

SIGMA蛋白酶K的應(yīng)用主要在實(shí)驗(yàn)室，在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用廣泛。

（1）尤其適用于DNA、RNA 提取過程中抑制核酸酶；

（2）用于原位雜交，處理組織碎片以保證的探針篩選；

（3）通過修飾細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)和糖蛋白以確定蛋白質(zhì)在膜上的位置；

（4）準(zhǔn)備菌落轉(zhuǎn)移時(shí)除去細(xì)胞碎屑；

（5）通過激活細(xì)菌自溶因子促進(jìn)細(xì)胞溶解；

（6）為脈沖電場(chǎng)凝膠電泳、RT-PCR等準(zhǔn)備無DNase、RNase的樣品；

（7）有助于從組織中線粒體提取；

（8）傳染性海綿狀腦病的研究中用于分解腦組織樣品中的蛋白朊病毒；

（9）指紋印跡。